在使用ProteanFect CRISPRMax Ultra轉染試劑盒時,如何提升原代細胞轉染效率?轉染后細胞沉淀不明顯怎么辦?本文匯總高頻問題,助您快速優(yōu)化實驗!
Q1:轉染效率低如何解決?
A:建議延長孵育時間(原代細胞≤30分鐘)或增加1.5-2.5倍轉染體系。同時,確保細胞活性>90%并優(yōu)化RNP摩爾比(Cas9:sgRNA=1:1-1:2.5)。
Q2:小體積轉染后看不到細胞沉淀?
A:此為正?,F象,細胞可能附著于管壁。移液時避免觸碰管底,減少細胞損失。
Q3:能否同時轉染多個sgRNA?
A:可以!96孔板體系中,sgRNA總量需≥10 pmol(濃度≥1 μg/μL),確保高效編輯。
Q4:貼壁細胞如何操作?
A:可選擇消化為懸液轉染(如表2),或提前種板后直接添加轉染混合液。
更多技巧(如原代細胞活化、EGFP對照使用)可參考說明書或聯系華雅思創(chuàng)生物:15021010459。
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