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產(chǎn)品名稱：KAPA HiFi高保真酶

產(chǎn)品貨號：KK2601/KK2602         產(chǎn)品規(guī)格：100 Rxns/500 Rxns

KAPA HiFi高保真酶是二代基因工程酶，分熱啟動版和非熱啟動版，保真性強，活力超高。具有以下特點：

1）超高保真，通過大規(guī)模二代測序得出的出錯率：2.8×10-7

2）可以擴增各種復雜模板；

3）擴增片段長，擴增基因組可達15kb，質(zhì)粒DNA或噬菌體DNA可達18kb；

4）擴增速度快，節(jié)省75%以上的時間；

5）KAPA高保真熱啟動酶，含有2中buffer，分別用于常規(guī)模板和高難度模板。

2、應用

1）基因定點突變；2）測序；3）蛋白表達。

3、產(chǎn)品表現(xiàn)

1）超級保真、靈敏

2）擴增復雜模板————無可匹敵

3）退火溫度對條帶特異性的重要性

4、PCR反應

1）推薦反應體系

2）推薦反應參數(shù)

注意事項：

1）HiFi Buffer中鹽離子濃度較高，影響DNA變性/退火，所以復雜模板需要較長的變性溫度，5分鐘；GC Buffer主要針對高GC或穩(wěn)定二級結(jié)構(gòu)的模板，僅當HiFi Buffer效果不佳時使用，但其會降低保真性；

2）每個循環(huán)中變性條件為：98℃20s；

3）**退火溫度需通過梯度PCR優(yōu)化得到；根據(jù)Tm值設定*的退火溫度，然后若要增加靈敏度可每次提高1℃，若要提高特異性每次降低1℃；

4）推薦延伸時間：30s/kb；若模板濃度高，可降低延伸時間，但較長的延伸時間會增加實驗的靈敏度和產(chǎn)量；

5）推薦25個或更少的循環(huán)數(shù)，若起始模板濃度低或擴增效率偏低導致產(chǎn)量不高，可增加至30-35個循環(huán)；

6）該體系可擴增≥10kb的目的基因片段。若實驗對MgCl2有特殊要求，請進行梯度試驗，每次增加或減少0.25mM；

7）根據(jù)實驗要求可調(diào)整HiFi酶的濃度，范圍：0.25U-1.0U/25μl；

8）末端加A，HiFi高保真酶擴增產(chǎn)物是平末端，若要連接到T載體上，擴增產(chǎn)物純化后用KAPA Taq DNA酶進行72℃延伸，因為未純化的產(chǎn)物中含有HiFi酶，其校對活性影響加A效果。

5、問題及解決方案

6、產(chǎn)品信息

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