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| 產(chǎn)地 | |
| 品牌 | KAPA |
| 貨號 | KK2601 |
| 用途 | 擴增 |
| 包裝規(guī)格 | 100 Rxns |
| CAS編號 | |
| 純度 | % |
| 是否進口 | 是 |
產(chǎn)品名稱：HiFi HotStart ReadyMix PCR Kit
產(chǎn)品貨號：KK2601/KK2602 產(chǎn)品規(guī)格：100 Rxns/500 Rxns
KAPA HiFi高保真酶是二代基因工程酶，分熱啟動版和非熱啟動版，保真性強，活力超高。具有以下特點：
1）超高保真，通過大規(guī)模二代測序得出的出錯率：2.8×10-7
2）可以擴增各種復雜模板；
3）擴增片段長，擴增基因組可達15kb，質(zhì)粒DNA或噬菌體DNA可達18kb；
4）擴增速度快，節(jié)省75%以上的時間；
5）KAPA高保真熱啟動酶，含有2中buffer，分別用于常規(guī)模板和高難度模板。
產(chǎn)品描述KAPA HiFi點燃了DNA聚合體是b家族的DNA聚合酶，被設計來增加對DNA的親和力。不需要輔助蛋白或DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。與野生型b族DNA聚合酶相比，該酶內(nèi)在的高加工性導致在產(chǎn)量、速度和敏感性方面的顯著提高。此外，擴增長片段以及富GC-和at目標的能力也得到了顯著提高。該酶與一種專有抗體結(jié)合，在*步變性之前使酶失活。這可以防止在反應設置期間的非特異性放大，增加靈敏度，并提高反應效率。在ReadyMix PCR試劑盒中，KAPA HiFi熱啟動DNA聚合酶以方便的2X ReadyMix格式提供，包含除引物和模板外的所有反應組分。預混合物包含KAPA HiFi熱啟動DNA聚合酶(每25 uL反應0.5 U)，在專用反應緩沖液中包含dNTPs(每dNTP在1倍濃度下0.3 mM)、MgCl(在1倍濃度下2.5 mM)和穩(wěn)定劑。KAPA HiFi熱啟動ReadyMix是專為常規(guī)，高保真PCR，廣泛的目標和片段大小。它提供的錯誤率大約比野生型標簽DNA聚合酶低100倍，成功率和產(chǎn)量比野生型b族(校對)DNA聚合酶更高。此外，與野生型b族DNA聚合酶相比，KAPA HiFi熱啟動需要更短的循環(huán)時間。
1、產(chǎn)品表現(xiàn)
1）超級保真、靈敏
2）擴增復雜模板————無可匹敵
3）退火溫度對條帶特異性的重要性
2、PCR反應
1）推薦反應體系
2）推薦反應參數(shù)
3、應用
1）基因定點突變；2）測序；3）蛋白表
注意事項：
1）HiFi Buffer中鹽離子濃度較高，影響DNA變性/退火，所以復雜模板需要較長的變性溫度，5分鐘；GC Buffer主要針對高GC或穩(wěn)定二級結(jié)構(gòu)的模板，僅當HiFi Buffer效果不佳時使用，但其會降低保真性；
2）每個循環(huán)中變性條件為：98℃20s；
3）退火溫度需通過梯度PCR優(yōu)化得到；根據(jù)Tm值設定的退火溫度，然后若要增加靈敏度可每次提高1℃，若要提高特異性每次降低1℃；
4）推薦延伸時間：30s/kb；若模板濃度高，可降低延伸時間，但較長的延伸時間會增加實驗的靈敏度和產(chǎn)量；
5）推薦25個或更少的循環(huán)數(shù)，若起始模板濃度低或擴增效率偏低導致產(chǎn)量不高，可增加至30-35個循環(huán)；
6）該體系可擴增≥10kb的目的基因片段。若實驗對MgCl2有特殊要求，請進行梯度試驗，每次增加或減少0.25mM；
7）根據(jù)實驗要求可調(diào)整HiFi酶的濃度，范圍：0.25U-1.0U/25μl；
8）末端加A，HiFi高保真酶擴增產(chǎn)物是平末端，若要連接到T載體上，擴增產(chǎn)物純化后用KAPA Taq DNA酶進行72℃延伸，因為未純化的產(chǎn)物中含有HiFi酶，其校對活性影響加A效果。
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