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| 產(chǎn)地 | 美國 |
| 品牌 | glycotope |
| 貨號(hào) | 10-0800 |
| 用途 | 臨床診斷 |
| 包裝規(guī)格 | 24 Tests |
| CAS編號(hào) | |
| 純度 | 1% |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
MIGRATEST™ 試劑盒 341059替換裝
產(chǎn)品名稱：MIGRATEST™
產(chǎn)品貨號(hào)：10-0800
產(chǎn)品描述：
該測(cè)試允許流式細(xì)胞術(shù)定量測(cè)定嗜中性粒細(xì)胞的趨化功能。與Boyden chamber技術(shù)類似，該試劑盒包含用于趨化性研究的多孔板和預(yù)包覆的細(xì)胞培養(yǎng)插入物、化學(xué)肽N-formyl-Met-Leu-Phe (fMLP)、抗體試劑、計(jì)數(shù)珠和必要的試劑。它允許測(cè)定通過細(xì)胞培養(yǎng)插入向趨化劑fMLP的濃度梯度遷移的中性粒細(xì)胞的數(shù)量。同時(shí)，通過分析細(xì)胞正向散射譜的變化，可以分析細(xì)胞粘附分子l -選擇素表達(dá)的減少和細(xì)胞形態(tài)的變化。
準(zhǔn)備和存儲(chǔ)：將工具放在暗處2-8處(冰箱)。細(xì)胞培養(yǎng)插入物和多壁板可在室溫下保存。試劑C和E工作液使用后需棄用。試劑中提供了不影響嗜堿性粒細(xì)胞趨化功能的防腐劑。當(dāng)按說明儲(chǔ)存時(shí)，這些試劑在包裝標(biāo)簽上顯示的時(shí)間內(nèi)是穩(wěn)定的。
過程
1. 準(zhǔn)備工作:1.1用B試劑稀釋原溶液- C試劑，1:200(體積根據(jù)需要，如5 ul / 1ml，每次試驗(yàn)350 ul)。試劑E, 1:50(例如:5 ul / 250 ul)每項(xiàng)測(cè)試20 ul)。1.2水浴預(yù)熱至37攝氏度(溫度精確控制!)1.3準(zhǔn)備冰浴1.4流式細(xì)胞儀開機(jī)校準(zhǔn)。
2. 白細(xì)胞隔離:從每位患者和對(duì)照組中采集5 ml肝素化全血，用標(biāo)準(zhǔn)無菌技術(shù)采集血液。不要使用EDTA或檸檬酸抗凝血!2.1將1ml肝素化全血小心覆蓋于A試劑上。2.2小瓶放置在室溫下不動(dòng)。40分鐘后形成以下階段:上層包含白細(xì)胞和血小板(白細(xì)胞蛋白豐富的血漿=LRP)和下層包含紅細(xì)胞。使用較舊的血樣時(shí)，紅細(xì)胞的沉淀需要較長的時(shí)間。2.3刪除約。白細(xì)胞增多血漿(上期)500 ul。將cel懸液移入一個(gè)1ml或2ml的試管中。分離的細(xì)胞應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)用于趨化性分析。
3.MIGRATESTTM設(shè)置:3.1將試劑B或試劑C工作液滴入多孔板的兩孔中，為eac患者或?qū)φ战M準(zhǔn)備以下樣品:負(fù)控制樣品試劑B的350ul陽性對(duì)照(試驗(yàn))樣品:試劑C工作溶液的350ul3.2將細(xì)胞培養(yǎng)插片放入雙孔。在每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液中加入100 ul的富白細(xì)胞血漿。3.3培養(yǎng):多孔板在37℃水浴中孵育30分鐘，不使用shakinq。3.4在孵育時(shí)間結(jié)束時(shí)，手動(dòng)將細(xì)胞培養(yǎng)插入物從多孔板中取出。從多向板的兩個(gè)孔中加入細(xì)胞懸浮液到兩個(gè)單獨(dú)的5毫升試管(試管1和試管2)，并將試管放在冰上。此外，來自富含白細(xì)胞血漿的未受刺激的細(xì)胞可以作為l -選擇素的對(duì)照。為此，將20 ul的cel懸液從陰性對(duì)照樣品的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中與180 ul的試劑B混合，并將該混合物轉(zhuǎn)移到第三個(gè)5 ml的試管中(試管3)3.5用D試劑標(biāo)記:每管添加20 ul試劑D(每個(gè)患者3管)。漩渦和孵化管10分鐘的冰浴，cov。防止暴露在陽光下3.6活體染色:每管加入1 x試劑E 20 ul，混合并在冰浴中光照保護(hù)5分鐘。測(cè)量細(xì)胞懸液在120分鐘內(nèi)
4. 流儀分析:使用藍(lán)綠激發(fā)光(488 nm氬離子激光，e.q..)流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞。FACSCaliburrM CellQuestnM軟件)
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