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| 產(chǎn)地 | 日本 |
| 品牌 | TAKARA |
| 貨號(hào) | 635741 |
| 用途 | 提取細(xì)胞外囊泡 |
| 英文名稱 | Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit (Mini) |
| 包裝規(guī)格 | 20 Minipreps |
| CAS編號(hào) | |
| 別名 | |
| 純度 | % |
| 是否進(jìn)口 |
| 產(chǎn)品概述 |
| 本制品是基于Capturem新型膜技術(shù)的一次性使用離心柱，可在30 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)血漿等多種生物體液樣品中細(xì)胞外囊泡（EVs）的簡(jiǎn)單快速提取。其基本原理是根據(jù)EVs的生化性質(zhì)，選擇與其特異性結(jié)合的凝集素（非抗體）固定于Capturem™膜上，進(jìn)而對(duì)EVs進(jìn)行提取，產(chǎn)物純度高、污染少。 |
| ■ 產(chǎn)品特點(diǎn) |
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· 適用范圍廣— 可應(yīng)用于全血、血漿、血清、唾液、尿液、腦脊液、母乳、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等多種生物體液樣品中的EVs提取 · 快速、重復(fù)性好- 30 min內(nèi)即可從*850 μl（Mini）或24 ml（Maxi）生物體液樣品中快速提取EVs，不同操作者也可獲得具有重復(fù)性的EVs收量 · 收量高— EVs*收量可達(dá)1010（Mini）或1011（Maxi），可獲得足夠的exosomal RNA應(yīng)用于下游的RT-qPCR、 NGS等研究 · 純度高— 提取的EVs經(jīng)Western Blot檢測(cè)表達(dá)exosome蛋白質(zhì)，而不表達(dá)nonexosomal污染蛋白質(zhì)，如calnexin和 albumin · 完整性好- 基于凝集素的提取原理，EVs不易被破壞，TEM下觀察呈經(jīng)典形態(tài) · 簡(jiǎn)單易用— 試劑盒組分配備齊全，包含一次性的預(yù)清潔柱，一次性的離心柱，以及平衡、洗滌和洗脫緩沖液，且經(jīng)過優(yōu)化，操作簡(jiǎn)便 |
| ■ 操作流程 |
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注：1. *過濾步驟使用100-kDa MWCO的過濾裝置，過濾時(shí)間取決于樣品的類型和體積。 2. 本制品*載樣量約為1010 EVs/column（Mini）或1011 EVs/column（Maxi），多次上樣收量也不會(huì)超過*值。 |
| ■ 實(shí)驗(yàn)例 |
| 實(shí)驗(yàn)例 1 |
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| 與超速離心法相比，本制品分離得到的EVs濃度和純度更高。分別使用本制品和超速離心法從500 μl血漿樣品中分離EVs，進(jìn)行三次重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，使用Nanoparticle tracking analysis (NTA) 檢測(cè)。每種方法的粒徑分布計(jì)算以平均值（黑線）和標(biāo)準(zhǔn)誤差（紅線）顯示。結(jié)果顯示，本制品提取的EVs平均粒徑大小為81 nm（D90=110 nm），超速離心法提取的EVs平均粒徑大小為135 nm（D90=203 nm）。上圖可見，使用本制品提取的EVs具有更窄的粒徑分布范圍，且穩(wěn)定性更好。 |
| 實(shí)驗(yàn)例 2 |
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| 使用本制品成功地從不同生物體液樣品中提取EVs。上圖NTA結(jié)果顯示，本制品可以應(yīng)用于多種生物體液樣品的EVs提取，如母乳、唾液、腦脊液、血清、尿液、條件培養(yǎng)基。每種方法的粒徑分布計(jì)算以平均值（黑線）和標(biāo)準(zhǔn)誤差（紅線）顯示。 |
| 實(shí)驗(yàn)例 3 |
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| 對(duì)使用本制品與超速離心法提取的EVs中的目的蛋白質(zhì)進(jìn)行Western blot分析。結(jié)果顯示，與超速離心法相比，本制品提取的EVs包含更多的exosome特異性標(biāo)記物CD63、CD9和Alix，而non-exosome蛋白質(zhì)（calnexin和albumin）含量較少。因此，本制品提取的EVs純度更高、污染蛋白質(zhì)更少。 |
| 實(shí)驗(yàn)例 4 |
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| 與超速離心法相比，使用本制品提取的EVs，可獲得更高的RNA收量。使用Capturem EV kit（Mini）從50 μl血漿中提取的EVs可以獲得約100 pg/μl的RNA，而使用超速離心法，至少需要300 μl血漿才能獲得同樣收量的RNA。而使用Capturem EV kit（Maxi）從大量樣本中提取的EVs，也可以獲得穩(wěn)定的RNA收量。 |
| 實(shí)驗(yàn)例 5 |
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| 使用本制品提取的EVs，可獲得足夠的RNA用于下游RT-qPCR實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)例是對(duì)Capturem分離的EVs進(jìn)一步提取RNA再進(jìn)行miRNA篩選。 首先使用PrimeScript RT Master Mix（Perfect Real Time）將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后使用Takara PreAmp Master Mix進(jìn)行預(yù)擴(kuò)增。應(yīng)用SmartChip Real Time PCR系統(tǒng)對(duì)所得cDNA庫進(jìn)行1,200個(gè)miRNA靶標(biāo)篩選，結(jié)果檢測(cè)到108個(gè)miRNA，對(duì)表達(dá)量前8的miRNA進(jìn)行了芯片外驗(yàn)證，結(jié)果顯示miR-548w，miR-496，miR-744-3p，miR-660-3，miR-3167和miR-376A-3p在分離的EVs樣品中拷貝數(shù)*，其中很多microRNA已被驗(yàn)證過在血漿來源的EVs中表達(dá)量較高。本實(shí)驗(yàn)例表明，Capturem分離的EVs包含足夠的RNA可用于下游的RT-qPCR實(shí)驗(yàn)。 |
| 實(shí)驗(yàn)例 6 |
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使用本制品提取的EVs，可獲得足夠的RNA用于下游NGS實(shí)驗(yàn)。以本制品提取的EVs中的RNA為樣本，使用SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit v2 - Pico Input Mammalian進(jìn)行NGS建庫。Bioanalyzer trace表明構(gòu)建了良好且統(tǒng)一的文庫，后續(xù)的測(cè)序表明，構(gòu)建得到的NGS文庫基因覆蓋度良好。
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