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產(chǎn)品名稱：Pharmingen Transcription Factor Buffer Set

產(chǎn)品貨號(hào)：562574

產(chǎn)品說明：

應(yīng)用: 細(xì)胞內(nèi)染色（流式細(xì)胞儀）（常規(guī)測(cè)試）

產(chǎn)品描述

BD Pharmingen™轉(zhuǎn)錄因子緩沖液套裝優(yōu)化用于在免疫熒光染色和表達(dá)特定胞質(zhì)內(nèi)和核內(nèi)蛋白的細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析之前固定和透化細(xì)胞。BD Pharmingen™轉(zhuǎn)錄因子緩沖液組旨在提高易用性和小化處理時(shí)間，減少非特異性染色，提高陽性染色細(xì)胞的分辨率，并顯著減少固定，透化和染色過程中的細(xì)胞損失。使用BD Pharmingen TM轉(zhuǎn)錄因子緩沖液組改善了已知在各種細(xì)胞內(nèi)區(qū)室內(nèi)表達(dá)的許多蛋白質(zhì)，尤其是轉(zhuǎn)錄因子的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。已發(fā)現(xiàn)該緩沖系統(tǒng)可用于固定和透化來自不同人和小鼠組織的各種細(xì)胞類型。緩沖系統(tǒng)可靈活地支持多孔板高通量和大量樣品分析以及需要隔夜樣品存儲(chǔ)的應(yīng)用。緩沖系統(tǒng)對(duì)加工細(xì)胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導(dǎo)致與新鮮制備的，高度存活的原代細(xì)胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細(xì)胞固定和透化之前和之后都與細(xì)胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)可靈活地支持多孔板高通量和大量樣品分析以及需要隔夜樣品存儲(chǔ)的應(yīng)用。緩沖系統(tǒng)對(duì)加工細(xì)胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導(dǎo)致與新鮮制備的，高度存活的原代細(xì)胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細(xì)胞固定和透化之前和之后都與細(xì)胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)可靈活地支持多孔板高通量和大量樣品分析以及需要隔夜樣品存儲(chǔ)的應(yīng)用。緩沖系統(tǒng)對(duì)加工細(xì)胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導(dǎo)致與新鮮制備的，高度存活的原代細(xì)胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細(xì)胞固定和透化之前和之后都與細(xì)胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)對(duì)加工細(xì)胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導(dǎo)致與新鮮制備的，高度存活的原代細(xì)胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細(xì)胞固定和透化之前和之后都與細(xì)胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。緩沖系統(tǒng)對(duì)加工細(xì)胞的光散射和自發(fā)熒光特性的影響小，導(dǎo)致與新鮮制備的，高度存活的原代細(xì)胞所觀察到的特征相似的特征。在許多情況下，發(fā)現(xiàn)緩沖系統(tǒng)在細(xì)胞固定和透化之前和之后都與細(xì)胞表面抗原的免疫熒光染色相容。緩沖系統(tǒng)還與許多串聯(lián)熒光染料兼容。

產(chǎn)品介紹：

細(xì)胞內(nèi)染色方案

1.固定：細(xì)胞表面染色程序完成后，吸出殘留的染色緩沖液并通過短暫渦旋松開細(xì)胞沉淀。向每個(gè)管中加入1mL新鮮制備的1x Fix / Perm緩沖液工作溶液，并通過渦旋振蕩約3秒重懸細(xì)胞沉淀。將樣品在2-8°C孵育40-50分鐘，避光。

2洗滌：將1ml 1x Perm /洗滌緩沖液直接加入懸浮在1x Fix / Perm緩沖液中的固定和透化細(xì)胞中。離心沉淀細(xì)胞。（注意：Fix / Perm后的所有離心步驟均為350 g ，在2-8°C下進(jìn)行6分鐘）。傾倒或吸出上清液。

3.洗滌：向沉淀的細(xì)胞中加入2ml 1x Perm /洗滌緩沖液，然后離心。傾析或吸出洗滌緩沖液。

4.細(xì)胞內(nèi)染色：向細(xì)胞樣品中加入80-100μl的1x Perm / Wash Buffer和對(duì)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)特異的熒光抗體（如FoxP3，T-bet和/或IL-17A）和非特異性對(duì)照染色（例如，匹配熒光Ig同種型對(duì)照）到每個(gè)管。渦旋管或支架10秒鐘，在2-8°C溫育40-50分鐘，避光。

5洗滌：在洗滌之前簡(jiǎn)單地渦旋樣品。用2ml 1x Perm /洗滌緩沖液洗滌細(xì)胞。離心細(xì)胞。傾倒或吸出洗滌緩沖液。

6.洗滌：用2ml 1x Perm / Wash洗滌細(xì)胞。離心細(xì)胞。傾析或吸出洗滌緩沖液。

7.用于流式細(xì)胞術(shù)的樣品制備：將細(xì)胞沉淀重懸于350μl流式細(xì)胞術(shù)染色緩沖液中。使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞并獲取數(shù)據(jù)。