CHANG Amnio羊水培養(yǎng)基使用說明

原代培養(yǎng)：原位法

1. 將羊水低速離心以濃縮細(xì)胞。

2. 用少量病人自己的羊水重懸細(xì)胞顆粒。例如，將10ml羊水紡絲上清吸至細(xì)胞顆粒上方0.5mL，再懸浮。在濃縮的細(xì)胞懸液中加入足夠的CHANG Amnio®，使最終鍍液體積為每個蓋片0.5mL(共4個蓋片)或每個小瓶2mL。

3.在37°C、5%-8%的CO2大氣中不受干擾地培養(yǎng)。

4. 第2天淹水培養(yǎng)，加入2mL CHANG Amnio®。

5. 4 - 5天后，檢查培養(yǎng)物的生長情況。一旦觀察到生長情況，應(yīng)飼喂培養(yǎng)物。去除所有培養(yǎng)上清，用2mL新鮮CHANG Amnio®替換培養(yǎng)物。建議以后每2天喂一次培養(yǎng)液。

6. 在第5天或之后檢查培養(yǎng)物的生長情況，當(dāng)觀察到足夠的菌落時采摘。

7. 結(jié)果是在收獲前一天用CHANG Amnio進(jìn)行培養(yǎng)。

原代培養(yǎng)：培養(yǎng)瓶法

1. 將羊水低速離心以濃縮細(xì)胞。

2. 用少量病人自己的羊水重懸細(xì)胞顆粒。例如，將10mL羊水紡絲上清吸至細(xì)胞顆粒上方1mL，再懸浮。加入4mL CHANG Amnio，總體積為每瓶5mL。

3.在37°C、5%-8%的CO2大氣中不受干擾地培養(yǎng)。

4. 第5天檢查生長情況。用新鮮羊膜更換培養(yǎng)基，如果觀察到足夠的細(xì)胞生長就收割。

5. 檢查培養(yǎng)物的生長情況，此后每天更換培養(yǎng)基，直到觀察到足夠的菌落并準(zhǔn)備收獲。

6. 結(jié)果是在收獲前一天用CHANG Amnio進(jìn)行培養(yǎng)。

傳代培養(yǎng)

要傳代細(xì)胞，用胰蛋白酶(或pronase，等等)處理培養(yǎng)物，就像你通常在傳統(tǒng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞那樣。但是，應(yīng)該仔細(xì)監(jiān)測蛋白酶的處理。在CHANG羊膜中培養(yǎng)的羊水細(xì)胞對蛋白酶的敏感性高于在常規(guī)培養(yǎng)基中培養(yǎng)的羊水細(xì)胞?？赡苡斜匾薷哪膮f(xié)議以考慮到這一點。用于培養(yǎng)的培養(yǎng)基的pH值必須在6.65-7.44之間(即培養(yǎng)基必須是微黃的鮭魚色)。pH值可以很容易地調(diào)整，只需將培養(yǎng)基放在5%-8%的CO2培養(yǎng)箱中，輕輕松開蓋子約30分鐘。

注:羊膜常形成草酸鈣晶體。這些晶體的存在尚未被證明會對產(chǎn)品性能造成任何不利影響。